Clínica, auxología y calidad de vida en cincuenta niños, niñas y adolescentes con síndromes de sobrecrecimiento corporal segmentario de un único centro / Clinical and auxological characteristics and quality of life of 50 children and adolescents with segmental overgrowth syndromes at a single center

Introducción. Los síndromes de sobrecrecimiento corporal segmentario son un grupo de enfermedades poco frecuentes caracterizadas por exceso de crecimiento en una o más partes del cuerpo relacionadas, en su mayoría, con mutaciones en mosaico en la vía de señalización AKT/PI3K/mTOR y RAS-MAPK. Nuestro objetivo fue analizar las características clínicas y auxológicas, y la calidad de vida relacionada a salud (CVRS) en este grupo de pacientes en un hospital de tercer nivel de atención. Población y métodos. Estudio transversal de una cohorte en seguimiento. Se analizaron edad, sexo, datos sociodemográficos, mediciones antropométricas del segmento afectado y del contralateral, complicaciones, tratamiento, calidad de vida (PedsQL4.0) y dolor. Se calcularon medidas centrales y de dispersión. Se realizó análisis univariado entre calidad de vida y variables incluidas. Resultados. Se incluyeron 50 pacientes, 29 varones. Mediana de edad 9,95 (r 1,44-17,81) años. El diagnóstico más frecuente fue síndrome de sobrecrecimiento relacionado a PIK3CA (PROS) (37/50). Mediana de número de segmentos afectados 2 (r: 1-7) por niño. Cuarenta casos presentaron malformación vascular; 20, capilar. El dolor (24/50) fue la complicación más frecuente. Treinta y un pacientes mostraron asimetría de longitud de miembros inferiores, < 5 cm. La estatura se ubicó entre los centilos 50 y 97 en la mayoría de los niños. Menor CVRS se observó en mujeres, en pacientes con malformación vascular compleja y necesidades básicas insatisfechas (NBI). Conclusiones. PROS fue el diagnóstico más frecuente. El dolor fue una complicación frecuente. La CVRS fue menor en mujeres, pacientes con malformación vascular combinada y NBI.

Introduction. Segmental overgrowth syndromes are a group of rare diseases characterized by overgrowth in one or more parts of the body, mostly related to mosaic mutations in the AKT/PI3K/mTOR and RASMAPK signaling pathway. Our objective was to analyze the clinical and auxological characteristics and health-related quality of life (HRQoL) in this group of patients at a tertiary care hospital. Population and methods. Cross-sectional study of a follow-up cohort. Age, sex, sociodemographic data, anthropometric measurements of the affected and contralateral segments, complications, treatment, quality of life (PedsQL 4.0), and pain were analyzed. Central and dispersion measures were estimated. A univariate analysis between the quality of life and study variables was done. Results. A total of 50 patients were included; 29 were males. Median age: 9.95 (r: 1.44­17.81) years. The most common diagnosis was PIK3CA-related overgrowth spectrum (PROS) (37/50). The median number of affected segments was 2 (r: 1­7) per patient. Vascular malformations were observed in 40, and capillary malformations, in 20 patients. Pain was the most common complication (24/50). An asymmetry of the lower extremities of < 5 cm was observed in 31 patients. In most children, height was between the 50th and 97th percentiles. A lower HRQoL was observed among girls, patients with complex vascular malformations, and those with unmet basic needs (UBNs). Conclusions. PROS was the most common diagnosis. Pain was the most common complication. HRQoL was lower among girls, patients with combined vascular malformations, and those with UBNs.

Everolimus as a therapeutic option in refractory epilepsy in children with tuberous sclerosis: a systematic review / Everolimo como opção terapêutica na epilepsia refratária em crianças com esclerose tuberosa: uma revisão sistemática

Abstract Background Tuberous sclerosis (TS) is a multisystem genetic disease in which epilepsy is a frequent manifestation and is often difficult to control. Everolimus is a drug with proven efficacy in the treatment of other conditions related to TS, and some evidence suggests that its use benefits the treatment of refractory epilepsy in these patients. Objective To evaluate the efficacy of everolimus in controlling refractory epilepsy in children with TS. Methods A literature review was conducted in the Pubmed, BVS, and Medline databases, using the descriptors Tuberous sclerosis, Children, Epilepsy, and Everolimus. Original clinical trials and prospective studies published in Portuguese or English in the last decade that evaluated the use of everolimus as an adjuvant therapy in the control of refractory epilepsy in pediatric patients with TS were included. Results Our search screened 246 articles from electronic databases, 6 of which were chosen for review. Despite the methodological variations between the studies, most patients benefited from the use of everolimus to control refractory epilepsy, with response rates ranging from 28.6 to 100%. Adverse effects were present in all studies leading to dropouts of some patients; however, the majority were of low severity. Conclusion The selected studies suggest a beneficial effect of everolimus in the treatment of refractory epilepsy in children with TS, despite the adverse effects observed. Further studies involving a larger sample in double-blind controlled clinical trials should be performed to provide more information and statistical credibility.

Resumo Antecedentes A esclerose tuberosa (ET) é uma doença genética multissistêmica na qual a epilepsia é a manifestação neurológica mais frequente, sendo muitas vezes de difícil controle. O everolimo é uma droga com eficácia comprovada no tratamento de outras condições relacionadas à ET, e indícios sugerem benefícios de seu uso também no controle da epilepsia refratária nesses pacientes. Objetivo Avaliar a eficácia do everolimo no controle da epilepsia refratária em crianças com ET. Métodos Revisão de literatura nas bases de dados Pubmed, BVS e Medline, utilizando os descritores Tuberous sclerosis, Children, Epilepsy e Everolimus. Incluíram-se ensaios clínicos originais e estudos prospectivos publicados em português ou inglês na última década e que avaliassem o uso do everolimo como terapia adjuvante no controle da epilepsia refratária em pacientes pediátricos com ET. Resultados Nossa busca rastreou 246 artigos nas bases de dados, dos quais 6 foram escolhidos para a revisão. Apesar das variações metodológicas entre os estudos, a maioria dos pacientes tiveram benefício no uso do everolimo para controle da epilepsia refratária, com taxas de resposta variando entre 28.6 e 100%. Os efeitos adversos estiveram presentes em todos os estudos, levando à desistência de alguns pacientes, contudo a maioria foi de baixa gravidade. Conclusão Os estudos selecionados sugerem efeito benéfico do everolimo no tratamento da epilepsia refratária em crianças com ET, apesar dos efeitos adversos observados. Novos estudos envolvendo uma amostra maior em ensaios clínicos controlados duplo-cegos devem ser realizados para fornecer mais informações e credibilidade estatística.

Utilidad del antígeno prostático específico total y del índice de antígeno prostático específico libre para detectar cáncer de próstata en el paciente asintomático / Utility of total prostate-specific antigen and free prostate- specific antigen index to detect prostate cancer in the asymptomatic patient

Resumen El antígeno prostático específico (PSA) en circulación se encuentra ligado a la alfa-1-quimiotripsina y una pequeña fracción circula de manera libre (PSAl). Se valoró la utilidad clínica del PSA total (PSAt) y el índice de PSA libre para la detección de cáncer prostático en pacientes asintomáticos. Se cuantificó el PSAt, el PSAl y el índice de PSAl en 364 pacientes estratificados por grupo de edad. La frecuencia de valores anormales de PSAt fue del 8,79% (32/364). El grupo de 50-59 años presentó la mayor incidencia de resultados anormales (19/32). No hubo diferencia estadísticamente significativa entre PSAt y el índice de PSAl (p<0,05). El índice PSAl puede potencializar el valor del PSAt para determinar la presencia o ausencia de cáncer prostático. Un índice superior a 0,24 ng/mL puede ayudar a evitar o posponer la indicación de biopsia, principalmente cuando los valores de PSAt están entre 4 y 10 ng/mL.

Abstract Circulating prostate-specific antigen (PSA) is bound to alpha-1-chymotrypsin and a small fraction is free (PSAl). The clinical utility of the total PSA (PSAt) and the PSAl index for prostate cancer screening in asymptomatic patients was assessed. PSAt, PSAl and the PSAl index were quantified in 364 patients stratified by age group. The frequency of abnormal PSAt values was 8.79% (32/364). The 50-59 year-old group presented the highest incidence of abnormal results (19/32). There was no statistically significant difference between PSAt and the PSAl index (p<0.05). The PSAl index can potentiate the PSAt value to determine the presence or absence of prostate cancer. An index greater than 0.24 ng/mL can help to avoid or postpone the indication for a biopsy, especially when the PSAt values are between 4 and 10 ng/mL.

Resumo O antígeno prostático específico (PSA) em circulação é ligado à alfa-1-quimotripsina e a uma pequena fração circula livremente (PSAl). A utilidade clínica do PSA total (PSAt) e do índice de PSAl livre para o rastreamento do câncer de próstata em pacientes assintomáticos foi avaliada. PSAt, PSAl e o índice de PSAl foram quantificados em 364 pacientes estratificados por faixa etária. A frequência de valores anormais de PSAt foi de 8,79% (32/364). O grupo de 50-59 anos apresentou a maior incidência de resultados anormais (19/32). Não houve diferença estatisticamente significativa entre o PSAt e o índice PSAl (p<0,05). O índice PSAl pode potencializar o valor do PSAt para determinar a presença ou ausência de câncer de próstata. Um índice superior a 0,24 ng/mL pode ajudar a evitar ou adiar a indicação de biópsia, principalmente quando os valores de PSAt estão entre 4 e 10 ng/mL.

La vía canónica PI3K/AKT/mTOR y sus alteraciones en cáncer / The PI3K/AKT/mTOR canonical pathway and its alterations in cancer

RESUMEN La vía PI3K/AKT/mTOR participa en múltiples procesos celulares fundamentales para la célula. Algunas mutaciones genéticas de los componentes de esta vía se han asociado a diversas enfermedades humanas: las más importantes son los carcinomas de mama, tiroides y endometrio, el glioblastoma multiforme, el cáncer de próstata y los linfomas. La vía canónica PI3K/AKT/mTOR se ha estudiado ampliamente en los últimos años. Sin embargo, el conocimiento de la complejidad de sus componentes principales y su interrelación con los elementos de otras vías va en aumento. Por ello, es importantes actualizar cada cierto tiempo la información disponible para la comprensión de este mecanismo. Así mismo, se están y se han desarrollado numerosos ensayos con medicinas selectivas en búsqueda de un tratamiento más inteligente para las enfermedades asociadas a alteraciones de esta vía. Por tanto, realizamos una revisión de esta vía de transducción con el objetivo de tener una visión cercana de su funcionamiento, sus alteraciones y enumerar algunas moléculas promisorias para ser utilizadas en futuros tratamientos.

ABSTRACT The PI3K/AKT/mTOR pathway is involved in multiple cellular processes which are essential for the cells. Some genetic mutations of the components of this pathway have been associated with various human diseases, the most important of which are breast, thyroid and endometrium carcinomas; glioblastoma multiforme; prostate cancer and lymphomas. The PI3K/AKT/mTOR canonical pathway has been extensively studied in recent years. However, as the complexity of its main components and their correlation with the components of other pathways are increasing, it is important to update from time to time the available information to understand this mechanism. Furthermore, many trials have been conducted with selective medicines aimed to look for a more intelligent treatment for diseases associated with alterations in this pathway. Therefore, we review this transduction pathway to take a close look at its functioning and alterations, and to list some promising molecules for future treatments.

Sarcoma de Kaposi ganglionar postrasplante renal: reporte de dos casos en un centro de trasplante colombiano Kaposi sarcoma in lymph nodes after kidney transplantation: report of two cases in a Colombian transplant center / Sarcoma de Kaposi ganglionar postrasplante renal: reporte de dos casos en un centro de trasplante colombiano Kaposi sarcoma in lymph nodes after kidney transplantation: report of two cases in a Colombian transplant center

El cáncer es una causa importante de morbilidad y mortalidad en los receptores de trasplante. La combinación de infecciones virales, terapia de inmunosupresión y la alteración en el sistema inmune en los pacientes trasplantados, contribuyen al desarrollo de cáncer. El sarcoma de Kaposi es causado por el virus herpes humano 8 (VHH-8), y aunque es raro en la población general, puede ser hasta 300 veces más frecuente en los pacientes con trasplante renal. El diagnóstico de la enfermedad se realiza a menudo con base en las características de las lesiones, pero debe ser confirmado por histología. En años recientes, los inhibidores de mTOR han mostrado ser efectivos para el control del sarcoma de Kaposi en los pacientes trasplantados, ya que se interrumpe el efecto antiapoptótico y la angiogénesis dependientes de la proteína mTOR, los cuales son esenciales para el desarrollo y la propagación de células malignas. Se presentan dos casos de pacientes con sarcoma de Kaposi ganglionar, sin lesiones en piel, en nuestro centro de trasplante, quienes respondieron de manera positiva al cambio del esquema inmunosupresor con inhibidores de mTOR

Cancer is a major cause of morbidity and mortality in transplant recipients. The combination of viral infections, immunosuppression therapy and immune system dysfunction in transplant patients contribute to the development of cancer. Kaposi sarcoma is caused by human herpes virus 8 (HHV-8) and although rare in the general population, it is reported to be up to 300 times more common in kidney transplant patients. Diagnosis of the disease is often made on the basis of the characteristic appearance of lesions, but must be confirmed by histology. In recent years, mTOR inhibitors have been shown to be effective in controlling Kaposi sarcoma in transplant patients, due to disruption of the antiapoptotic effect and angiogenesis dependent on the mTOR protein, which are essential for development and propagation of malignant cells. We present two case reports of patients with Kaposi sarcoma in lymph nodes and no skin lesions, who responded well to the immunosuppressive therapy switch with mTOR inhibitors

Assembly and release of Dengue virus: Role of Alix protein / Ensamblaje y liberación del virus dengue: controversia sobre la participación de la proteína alix

RESUMEN Algunos virus envueltos usurpan la maquinaria celular ESCRT (complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte) para llevar a cabo funciones como la transcripción, la traducción, el ensamblaje y la liberación de partículas virales desde las células huésped. Aunque esta estrategia ha sido estudiada principalmente en retrovirus, son varios los virus envueltos que la usan. El objetivo del trabajo fue explorar la participación de una proteína accesoria de ESCRT, la proteína Alix, en la transcripción, traducción, ensamblaje y liberación del virus dengue (DENV), así como su interacción con la proteína viral NS3. Células A549 infectadas con DENV2 fueron tratadas con pequeños ARN de interferencia (siRNA) para disminuir la expresión ("knock-down") de la proteína Alix. Simultáneamente, se obtuvo una línea A549 que expresaba una proteína NS3 recombinante y sobre este sistema se hicieron ensayos de inmunoprecipitación y "pull-down" para detectar interacción entre NS3 y Alix. Los resultados mostraron que el "knock-down" de Alix no tuvo efecto notable en la transcripción o la traducción viral, pero sí en el ensamblaje y la liberación de DENV2, mientras que los ensayos de "pull-down" revelaron la interacción entre NS3 y Alix. La participación de Alix en la producción de DENV2 y su interacción con NS3 constituyen un potencial blanco para el diseño de estrategias dirigidas a controlar la propagación de DENV.

ABSTRACT Since the finding that HIV recruits cellular ESCRT (endosomal sorting complexes required for transport) machinery to accomplish viral budding, this strategy has emerged as an escape route for enveloped viruses also. The work aimed to explore the participation of the cellular protein Alix (a human protein that acts as an adapter in the ESCRT pathway) on the transcription, protein expression, assembly and release of Dengue virus (DENV), and explore for its potential interaction with the viral protein NS3. To this purpose, A549 cells were infected with DENV2 and treated with small interfering RNAs (siRNA) to generate an Alix stable knockdown cells line. Also, an A549 cells line expressing a histidine-tagged NS3 protein was obtained. Both cells lines were used in immunoprecipitation and pull-down assays to assess the interaction between NS3 and Alix. The results showed that Alix knockdown had no effect on viral transcription or viral protein expression but influenced the assembly and release of DENV2 negatively. Finally, pull-down assays revealed the interaction between NS3 and Alix. The finding of an Alix participation in the production of DENV2 and its interaction with NS3 provides a potential target for the design of control/inhibition strategies against DENV spread.

Critical analysis of graft loss and death in kidney transplant recipients treated with mTOR inhibitors / Análise crítica da perda do enxerto e óbito em receptores de transplante renal tratados com inibidores da mTOR

Abstract Registry studies and systematic reviews have shown higher risk for mortality and graft loss in patients in use of mTOR inhibitors (mTORi) compared to calcineurin-based (CNI) immunosuppressive regimens. The majority of these studies pooled data from early trials using different strategies such as "de novo" combination of the high dose mTOR inhibitors with standard dose of CNI or high dose mTORi combined with mycophenolate. The large heterogeneity of these initial exploratory studies, many of them no longer in use, turns difficult any comparison with a well-defined standard of care regimen. The new strategies using concentration controlled reduced exposure of mTORi and CNI or early conversion from CNI to mTORi use have shown comparable patient and graft survival. Nevertheless, considering the central role of mTOR in health and disease states, more research is necessary to mitigate the adverse events and to explore further the potential beneficial effects of mTOR inhibitors.

Resumo Estudos de registro e revisões sistemáticas mostraram um aumento de mortalidade e perda do enxerto nos pacientes em uso dos inibidores da mTOR (imTOR) em comparação a regimes baseados nos inibidores de calcineurina (iCN). A maioria destes estudos reuniu dados de ensaios clínicos iniciais utilizando diferentes estratégias, tais como a combinação "de novo" de altas doses de imTOR com doses padrão de iCN ou altas doses de imTOR combinado com micofenolato. A grande heterogeneidade destes estudos exploratórios iniciais, muitos deles não mais em uso, tornam difícil qualquer comparação. As novas estratégias que utilizam a concentração controlada e reduziram a exposição tanto de imTOR quando de iCN mostraram sobrevida do paciente e enxerto comparáveis. No entanto, considerando o papel central dos imTOR nos estados de saúde e doença, é necessária mais investigação para mitigar os eventos adversos e explorar melhor seus potenciais efeitos benéficos.

ANCA-positive vasculitis: Clinical implications of ANCA types and titers / Vasculite ANCA positiva: implicações clínicas dos tipos e dos títulos de ANCA

SUMMARY Introduction: Anti-neutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-associated vasculitis is an autoimmune disease that can affect multiple organs, the kidney being one of the most affected. Apart from the diagnostics value of ANCA, they have also been advocated as biomarkers of the disease activity. Recently, the genetic changes found in polyangiitis associated with serine-protease proteinase 3 (PR3)-ANCA or myeloperoxidase (MPO)-ANCA raised the possibility of immune-pathogenic and therapeutic differences. Objective: To identify differences in the number of relapses, inflammatory markers, outcomes and renal histology related to the types of ANCA. To analyze the implications of ANCA titers in prognosis. Method: A retrospective observational study in a Portuguese tertiary hospital. Results: There were no differences in the progression of renal function, histological pattern and initial treatment with regard to ANCA subtypes. As for the evaluated parameters, there were no significant differences according to the types of ANCA, except for mean CRP values within the normal range, which was 6.3±1.3 mg/L for MPO-ANCA and 12.4±10.14 mg/L for PR3-ANCA (p=0.04). We found that 66.7% of the MPO-ANCA-positive showed no relapses versus 40% in the case of PR3-ANCA-positive. There was no correlation between the ANCA titers at presentation, during remission, and in the last evaluation, and the number of relapses. Conclusion: PR3-ANCA patients have a mean CRP value within the normal range significantly higher than that of MPO-ANCA patients (p=0.04), which seems to reveal greater inflammatory activity in the first.

RESUMO Introdução: a vasculite associada aos anticorpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA) é uma doença autoimune que pode acometer vários órgãos, sendo o rim um dos mais afetados. Além dos ANCA serem marcadores de diagnóstico, foram também defendidos como marcadores de atividade. Recentemente as alterações genéticas encontradas entre as poliangeítes serina-protease 3 da proteinase (PR3)-ANCA ou mieloperoxidase (MPO)-ANCA levantam a possibilidade de diferenças imunopatogênicas e terapêuticas. Objetivos: identificar diferenças quanto a número de recidivas, marcadores inflamatórios, desfechos e histologia renal relativamente aos tipos de ANCA. Analisar implicações dos títulos de ANCA no prognóstico. Método: estudo retrospectivo observacional em hospital terciário português. Resultados: não se verificaram diferenças quanto à evolução da função renal, ao padrão histológico e ao tratamento inicial relativamente aos subtipos de ANCA. Nos parâmetros analíticos avaliados, não se verificaram diferenças significativas relativas aos tipos de ANCA, à exceção do valor médio de PCR no intervalo que foi de 6,3±1,3 mg/L nos MPO-ANCA e 12,4±10,14 mg/L nos PR3-ANCA (p=0,04). Verificamos que 66,7% dos MPO-ANCA positivos não apresentaram recidivas versus 40% dos PR3-ANCA positivos. Não se verificou nenhuma correlação entre os títulos de ANCA à apresentação, durante a remissão e na última avaliação com o número de recidivas. Conclusão: os indivíduos PR3-ANCA apresentaram um valor médio de PCR nos intervalos superior aos indivíduos MPO-ANCA (p=0,04), o que parece evidenciar uma maior atividade inflamatória nos primeiros.

Vasculite sistêmica da síndrome de Cogan associada ao PR3-ANCA. Relato de caso / Systemic vasculitis of Cogan's syndrome associated with PR3-ANCA. Case report

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: A síndrome de Cogan (SC)caracteriza-se pela presença de ceratite intersticial não luética associada a manifestações de disfunção vestibulococlear. Este artigo tem como finalidade dar continuidade ao relato de caso da SC publicado nesse periódico em 2009, que mostra, agora em 2014, o acompanhamento ambulatorial durante 60 meses, os resultados laboratoriais, o tratamento realizado e faz uma breve revisão bibliográfica dos marcadores imunológicos. Também, como objetivo principal, apresentar essa rara entidade nosológica que, quando não tratada no início dos sintomas com imunossupressores, pode causar anacusia em 50% e amaurose em 10% dos pacientes e, em sua forma atípica, cursar com vasculite sistêmica. Como não encontramos citações na literatura mundial dessa associação - vasculite da SC com positividade de anticorpos dirigidos contra citoplasma de neutrófilos (c-ANCA) direcionados especificamente contra o antígeno serinaproteinase 3(PR3) - consideramos prudente novos artigos serem publicados no sentido de confirmar ou não esses achados clínico-laboratoriais. Ressaltamos que o paciente evoluiu satisfatoriamente para a cura, visto que permanece assintomático e com os exames de atividade inflamatória normais. RELATO DO CASO: Paciente do sexo masculino, 43 anos, branco, casado, comerciário,foi internado por 15 dias por apresentar hiperemia conjuntival, mialgias e febre com 30 dias de evolução. O diagnóstico foi realizado a partir do 11° dia, quando surgiram as seguintes manifestações: nistagmo, ataxia de marcha, tontura, náuseas e vômitos aos movimentos, dores articulares no punho, joelho e tornozelo esquerdos, acompanhadas de rubor e calor, acrescidas de sufusões hemorrágicas subungueais dolorosas em três dedos da mão esquerda, sugestivas de vasculite sistêmica. CONCLUSÃO: Este relato de caso apresenta aos profissionais médicos essa entidade rara, de difícil diagnóstico e de repercussões graves quando não bem tratada. Além disso,...

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Cogan's syndrome (CS) is characterized by the occurrence of non-luetic intersticial keratitis associated with vestibulocochlear dysfunction signs. This article aims to give continuity to a report on the CS published in this journal in 2009, and proposes to show a 60-month outpatient follow-up, laboratory results and treatment prescribed, as well as to give a brief literature review on immunological markers, as far as 2014. It also has the primary aim of presenting this rare nosological entity which, if not treated with immunosuppressive drugs at the onset of symptoms, can lead to deafness in 50% of the patients and amaurosis in 10% of them, and occur concomitantly with systemic vasculitis in its atypical form. As international literature citations on the CS vasculitis association with positivity of antibodies against neutrophil cytoplasm (c-ANCA) specifically directed against cytoplasmic antigen serine proteinase 3 (PR3) have not been found, it is suggested that new articles should be published in order to either confirm or deny these clinical and laboratory findings. It is noteworthy that the patient progressed satisfactorily towards healing, and remains asymptomatic with negative inflammatory activity exam results. CASE REPORT: a 43 year-old married male Caucasian salesclerk from Piratini (RS) was hospitalized for a 15-day period showing conjunctival hyperemia, myalgia and fever following a thirty-day evolution period. Diagnosis was only reached on the 11th day when the following signs appeared: nystagmus, motor ataxia, dizziness, nausea and vomiting upon moving, joint pain in the left wrist, knee and ankle, accompanied by redness and heat, in addition to painful subungual hemorrhagic suffusions in three left-hand fingers compatible with systemic vasculitis. CONCLUSION: This case describes a rare syndrome of difficult diagnosis and serious implications when not properly treated...

Use of sirolimus in the treatment of lymphangioleiomyomatosis: favorable responses in patients with different extrapulmonary manifestations / Uso de sirolimo no tratamento de linfangioleiomiomatose: resposta favorável em pacientes com diferentes manifestações extrapulmonares

OBJECTIVE: Lymphangioleiomyomatosis (LAM) is a rare disease that is currently considered a low-grade neoplasm with metastatic potential and variable progression. Mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitors, such as sirolimus and everolimus, have recently become a treatment option for LAM patients, especially those with extrapulmonary manifestations. The objective of the present study was to describe a case series of four patients with LAM in Brazil who showed significant improvement, particularly in their extrapulmonary manifestations, after treatment with sirolimus (at 1-4 mg/day). METHODS: We describe four cases of LAM patients with different extrapulmonary manifestations who were treated with sirolimus. RESULTS: After treatment with sirolimus for 12 months, one patient presented resolution of severe chylothorax; one had a significant reduction in renal angiomyolipoma volume; and one showed significant regression of retroperitoneal lymphangioleiomyomas and abdominal lymph node enlargement. After treatment with sirolimus for 6 months, the remaining patient had a significant reduction in the volume of a massive retroperitoneal lymphangioleiomyoma. CONCLUSIONS: Our findings confirm that mTOR inhibitors are beneficial for patients with LAM, especially those with extrapulmonary manifestations, such as renal angiomyolipoma, lymphangioleiomyomas, and chylous effusions. However, certain aspects, such as the optimal dose, duration of treatment, and long-term adverse effects, have yet to be sufficiently clarified for mTOR inhibitors to be incorporated into LAM management protocols. .

OBJETIVO: A linfangioleiomiomatose (LAM) é uma doença rara que é atualmente considerada uma neoplasia de baixo grau com potencial metastático e evolução variável. Os inibidores de mammalian target of rapamycin (mTOR), como o sirolimo e o everolimo, recentemente se tornaram uma opção para o tratamento de pacientes com LAM, especialmente daqueles com manifestações extrapulmonares. O objetivo deste estudo foi descrever quatro casos de pacientes com LAM no Brasil que apresentaram melhora, especialmente das manifestações extrapulmonares, após tratamento com sirolimo (em doses de 1-4 mg/dia). MÉTODOS: Descrevemos quatro casos de pacientes com LAM e diferentes manifestações extrapulmonares tratados com sirolimo. RESULTADOS: Após o tratamento com sirolimo por 12 meses, um paciente apresentou resolução do quilotórax de difícil manejo, um paciente teve redução significativa do volume do angiomiolipoma renal, e uma paciente apresentou regressão importante de linfangioleiomiomas retroperitoneais e linfonodomegalias abdominais. Após tratamento com sirolimo por 6 meses, um paciente apresentou redução significativa de volumoso linfangioleiomioma retroperitoneal. CONCLUSÕES: Nossos achados confirmam que os inibidores de mTOR são benéficos para pacientes com LAM, especialmente para aqueles com manifestações extrapulmonares, tais como angiomiolipomas renais, linfangioleiomiomas e derrames de origem quilosa. Entretanto, alguns pontos, tais como a dose ideal, a duração do tratamento e os efeitos adversos em longo prazo, ainda precisam ser esclarecidos para que os inibidores de mTOR possam ser incorporados na abordagem da LAM. .

Gender-Based Differences in Cardiac Remodeling and ILK Expression after Myocardial Infarction / Remodelamento Cardíaco e Expressão da ILK Diferem entre os Gêneros após Infarto do Miocárdio

Background: Gender can influence post-infarction cardiac remodeling. Objective: To evaluate whether gender influences left ventricular (LV) remodeling and integrin-linked kinase (ILK) after myocardial infarction (MI). Methods: Female and male Wistar rats were assigned to one of three groups: sham, moderate MI (size: 20-39% of LV area), and large MI (size: ≥40% of LV area). MI was induced by coronary occlusion, and echocardiographic analysis was performed after six weeks to evaluate MI size as well as LV morphology and function. Real-time RT-PCR and Western blot were used to quantify ILK in the myocardium. Results: MI size was similar between genders. MI resulted in systolic dysfunction and enlargement of end-diastolic as well as end-systolic dimension of LV as a function of necrotic area size in both genders. Female rats with large MI showed a lower diastolic and systolic dilatation than the respective male rats; however, LV dysfunction was similar between genders. Gene and protein levels of ILK were increased in female rats with moderate and large infarctions, but only male rats with large infarctions showed an altered ILK mRNA level. A negative linear correlation was evident between LV dimensions and ILK expression in female rats with large MI. Conclusions: Post-MI ILK expression is altered in a gender-specific manner, and higher ILK levels found in females may be sufficient to improve LV geometry but not LV function. .

Fundamento: O gênero pode ser decisivo no remodelamento cardíaco após infarto do miocárdio. Objetivo: Avaliar diferenças de gênero associadas ao remodelamento do ventrículo esquerdo (VE) após infarto do miocárdio (IM) e associadas à modulação de quinases acopladas à integrina (integrin-linked kinases-ILK). Métodos: Ratos Wistar machos e fêmeas foram divididos em 3 grupos: grupo sham, grupo com IM de extensão moderada (tamanho: 20-39% da área do VE); grupo com IM de grande extensão (tamanho: ≥ 40% da área do VE). O IM foi produzido por oclusão coronária e as análises ecocardiográficas foram obtidas após 6 semanas para avaliar a extensão do IM, bem como a morfologia e função do VE. RT-PCR em tempo real e Western blott foram realizados para quantificar a ILK no miocárdio. Resultados: A extensão do IM foi semelhante entre os gêneros. O IM resultou em disfunção sistólica e aumento do tamanho do VE no final da diástole e da sístole em função do tamanho da área necrótica para ambos os sexos. Ratos fêmeas com IM de grande extensão apresentaram dilatação diastólica e sistólica inferior a de ratos machos, mas a disfunção do VE foi semelhante em ambos os sexos. Os níveis gênicos e proteicos de ILK aumentaram em ratos fêmeas com infartos de extensão moderada e grande, mas apenas ratos machos com infartos de grande extensão apresentaram níveis alterados de mRNA do ILK. Uma correlação linear negativa foi observada entre as dimensões do VE e a expressão de ILK em ratos fêmeas com IM de grande extensão. Conclusões: A expressão de ILK pós-IM variou de maneira gênero-especifica, e os níveis mais elevados de ILK observados em ...

Assessment and partial purification of serine protease inhibitors from Rhipicephalus (Boophilus) annulatus larvae / Avaliação e purificação parcial dos inibidores da serina protease de larvas do Rhipicephalus (Boophilus) annulatus

Ticks are rich sources of serine protease inhibitors, particularly those that prevent blood clotting and inflammatory responses during blood feeding. The tick Rhipicephalus (Boophlus) annulatus is an important ectoparasite of cattle. The aims of this study were to characterize and purify the serine protease inhibitors present in R. (B.) annulatus larval extract. The inhibitors were characterized by means of one and two-dimensional reverse zymography, and purified using affinity chromatography on a trypsin-Sepharose column. The analysis on one and two-dimensional reverse zymography of the larval extract showed trypsin inhibitory activity at between 13 and 40 kDa. Through non-reducing SDS-PAGE and reverse zymography for proteins purified by trypsin-Sepharose affinity chromatography, some protein bands with molecular weights between 13 and 34 kDa were detected. Western blotting showed that five protein bands at 48, 70, 110, 130 and 250 kDa reacted positively with immune serum, whereas there was no positive reaction in the range of 13-40 kDa. Serine protease inhibitors from R. (B.) annulatus have anti-trypsin activity similar to inhibitors belonging to several other hard tick species, thus suggesting that these proteins may be useful as targets in anti-tick vaccines.

Carrapatos são uma rica fonte de inibidores da serina protease, particularmente aqueles que previnem coagulação e respostas inflamatórias durante a alimentação com sangue. O carrapato Rhipicephalus (B.) annulatus é um ectoparasita importante de bovinos. O objetivo deste estudo foi caracterizar e purificar os inibidores da serina protease presentes no extrato de larva do R. (B.) annulatus. Os inibidores foram caracterizados através de zimografia reversa uni e bidimensional e purificados com cromatografia de afinidade em uma coluna de sepharose-tripsina. A análise do extrato de larva pela zimografia reversa uni e bidimensional mostrou atividade inibitória de tripsina entre 13 e 40 kDa. Através de SDS-PAGE e zimografia reversa para proteínas purificadas pela cromatografia por sepharose-tripsina, algumas bandas de proteínas com pesos moleculares entre 13 e 34 kDa foram detectadas. Western blotting mostrou que cinco bandas de proteínas a 48, 70, 110, 130 e 250 kDa reagiram positivamente com o soro imune, enquanto não houve reação positiva nas bandas 13-40 kDa. Inibidores da serina protease do R. (B.) annulatus têm atividade antitripsina semelhante àquelas dos inibidores de outras espécies de carrapatos duros, sugerindo, assim, que essas proteínas podem ser úteis como alvo de vacinas contra carrapatos.

CHEK2 1100DELC germline mutation: a frequency study in hereditary breast and colon cancer Brazilian families / Mutação germinativa 1100delC no gene CHEK2: estudo da frequência em famílias brasileiras com câncer de mama e cólon hereditários

CONTEXT: CHEK2 encodes a cell cycle checkpoint kinase that plays an important role in the DNA damage repair pathway, activated mainly by ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated) in response to double-stranded DNA breaks. A germline mutation in CHEK2, 1100delC, has been described as a low penetrance allele in a significant number of families with breast and colorectal cancer in certain countries and is also associated with increased risk of contralateral breast cancer in women previously affected by the disease. About 5%-10% of all breast and colorectal cancers are associated with hereditary predisposition and its recognition is of great importance for genetic counseling and cancer risk management. OBJECTIVES: Here, we have assessed the frequency of the CHEK2 1100delC mutation in the germline of 59 unrelated Brazilian individuals with clinical criteria for the hereditary breast and colorectal cancer syndrome. METHODS: A long-range PCR strategy followed by gene sequencing was used. RESULTS: The 1100delC mutation was encountered in the germline of one (1.7%) individual in this high risk cohort. This indicates that the CHEK2 1100delC is not commonly encountered in Brazilian families with multiple diagnoses of breast and colorectal cancer. CONCLUSION: These results should be confirmed in a larger series of families and further testing should be undertaken to investigate the molecular mechanisms underlying the hereditary breast and colorectal cancer phenotype.

INTRODUÇÃO: CHEK2 codifica uma proteína quinase envolvida em um ponto de checagem do ciclo celular que desempenha um papel importante na via de reparação do DNA, danos ativados principalmente por ATM (Ataxia Telangiectasia Mutado) em resposta a danos na dupla hélice do DNA. A mutação germinativa 1100delC no gene CHEK2 tem sido descrita como um alelo de baixa penetrância em um número significativo de famílias com câncer de mama e cólon em certos países e também está associada com risco aumentado de câncer de mama contralateral em mulheres previamente afetadas pela doença. Cerca de 5%-10% de todos os cânceres de mama e colorretais estão associados a predisposição hereditária e o seu reconhecimento é de grande importância para o aconselhamento genético e gestão do risco de câncer. OBJETIVOS: Neste estudo foi avaliada a frequência da mutação germinativa 1100delC no gene CHEK2 em 59 diferentes indivíduos brasileiros com critérios clínicos para a síndrome de câncer de mama e cólon hereditários. MÉTODO: Utilizamos como estratégia a realização do PCR de longo alcance seguido de sequenciamento. RESULTADOS: A mutação 1100delC foi encontrada em um indivíduo (1,7%), indicando que esta mutação germinativa não é comumente encontrada em famílias brasileiras com múltiplos diagnósticos de câncer de mama e câncer colorretal. CONCLUSÃO: Estes resultados devem ser confirmados em uma série maior de famílias, e estudos adicionais devem ser realizados para investigar a patologia molecular do fenótipo HBCC.

Efeito in vitro de inibidores de proteases sobre trofozoítos de Giardia duodenalis / In vitro effect of protease inhibotors on trophozoites of giardia duodenalis

Entre os alvos mais promissores para o desenvolvimento de novos agentes antiparasitários, destacam-se as proteases que nos protozoários participam de processos metabólicos e fisiológicos, atuando como importantes fatores de virulência. Como a atividade dessas moléculas pode ser controlada por inibidores específicos, essas substâncias têm sido avaliadas quanto ao potencial terapêutico em diferentes infecções parasitárias, inclusive por Giardia. O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito in vitro dos inibidores de cisteína (IAA e E-64) e serina-proteases (antipaina, leupeptina e TLCK) sobre o crescimento, aderência, viabilidade e ultraestrutura de trofozoítos de cepa de Giardia isolada e axenizada em Botucatu. Para isso, trofozoítos foram incubados em meio contendo os inibidores a diferentes concentrações durante 24, 48 e 72 horas. Nos ensaios de crescimento e aderência, o número de trofozoítos foi estimado a partir de contagens em hemocitômetro, enquanto que a viabilidade celular e as alterações ultraestruturais foram avaliadas, respectivamente, pelo método de redução do MTT e por microscopia eletrônica de transmissão. De acordo com as observações feitas no presente estudo, todos os inibidores de proteases apresentaram efeito sobre o crescimento, aderência e viabilidade dos trofozoítos. Entretanto, melhor desempenho quanto à capacidade de reduzir os parâmetros avaliados foi demonstrado nos ensaios com os inibidores de cisteína-proteases, especialmente a IAA. As maiores porcentagens de inibição do crescimento e aderência e as menores taxas de viabilidade foram observadas após o tratamento com IAA...

The quest for new antiparasitic alternatives has led researchers to base their studies on insights into biology, host-parasite interactions and pathogenesis. In light of this, the proteolytic enzymes or proteases have excited the researcher’s interest, once they have been identified as important virulence factors as well as potential chemotherapeutic targets in parasites. Considering that proteases are naturally regulated by specific inhibitors, these substances have been evaluated for their therapeutic potential in parasitic infections including Giardia. In this way, we proposed to evaluate the in vitro effect of inhibitors of cysteine (IAA and E-64) and serine proteases (antipain, leupeptin and TLCK) on growth, adherence, viability and ultrastructure of Giardia trophozoites of a strain isolated and axenized in Botucatu. For this, trophozoites were incubated in medium containing the inhibitors at various concentrations for 24, 48 and 72 hours. In growth and adherence assays, the number of trophozoites was estimated microscopically in a haemocytometer, whereas cell viability and ultrastructural changes were evaluated, respectively, by the method of MTT and transmission electron microscopy. In this study, all protease inhibitors showed effect on growth, adherence and viability of trophozoites. However, better performance in their ability to reduce the parameters assessed was demonstrated in experiments with cysteine proteases inhibitors, especially IAA...

Characterization of the cGMP-dependent protein kinase SmcGK1 of Schistosoma mansoni

Schistosomes are trematode parasites and of worldwide medical importance for humans and animals. Growth and development of these parasites require a specific host environment, but also permanent communication processes between the two genders. Accumulating molecular evidence indicates that the responsible interactions are mediated by signal transduction processes. Conserved signaling molecules were identified, and first approaches made for their characterization. However, no representative of the conserved family of cGMP-dependent protein kinases (cGKs) has been described in this parasite yet. Within the Schistosoma mansoni genome data-set we identified cGK homologs, of which one was investigated in more detail in this study. We present the cloning of SmcGK1, whose sequence shows homology to cGKs of higher eukaryotes. SmcGK1 was found to be gender-independently transcribed in adult schistosomes. The occurrence of SmcGK1 sense and antisense transcripts suggests that the expression of this gene is controlled at the post-transcriptional level. In situ hybridization experiments demonstrated a gonad-preferential expression profile in both genders indicating a role of SmcGK1, at least during sexual development of schistosomes. Using a cGK-specific inhibitor to treat adult schistosomes in vitro finally resulted in a multifaceted phenotype including slow motion, oocyte congestion, and reduced egg production.

Esquistossomos são parasitas trematodos de importância médica em todo o mundo para o homem e os animais. O crescimento e o desenvolvimento destes parasitas requerem um ambiente específico do hospedeiro, mas também um processo de comunicação permanente entre parasitas dos dois sexos. Evidência molecular tem se acumulado e indica que as interações são mediadas por processos de transdução de sinal. Moléculas sinalizadoras conservadas foram identificadas, e as primeiras abordagens têm sido feitas para sua caracterização. Contudo, não foi ainda descrito nenhum representante da família conservada das proteína-quinases dependentes de cGMP (cGKs) neste parasita. Analisando o genoma do Schistosoma mansoni nós identificamos homólogos de cGK, dos quais um foi investigado em mais detalhe no presente estudo. Aqui apresentamos a clonagem do gene SmcGK1, cuja sequência mostra homologia com cGKs de eucariotos superiores. Smc- GK1 foi detectada como sendo transcrita de forma gêneroindependente em esquistossomos adultos. A ocorrência de transcritos de SmcGK1 senso e antisenso sugere que a expressão deste gene é controlada em nível pos-transcricional. Experimentos de hibridização in situ demonstraram uma expressão preferencial nas gônadas em ambos os gêneros, indicando um papel para SmcGK1, pelo menos durante o desenvolvimento de esquistossomos. Usando um inibidor específico de cGK para tratamento de esquistossomos adultos in vitro finalmente resultou em um fenótipo multifacetado, incluindo movimentos lentos, congestão dos oócitos, e redução da produção de ovos.

Interacción entre gabapentina y D-serina en la prueba orofacial de la formalina / Interaction between gabapentin and D-serin in the formalin orofacial test

La gabapentina es un agente útil para el alivio de la neuralgia del trigémino y el dolor orofacial fantasma. Sin embargo, existe poca información sobre el efecto antinociceptivo de la gabapentina en los modelos de dolor orofacial. En este trabajo se investigó el efecto antinociceptivo de la gabapentina sobre el acicalado facial en la rata, provocado por la inyección de la formalina, un paradigma de dolor orofacial. La dosis de 10 mg/kg IP de la gabapentina produjo una drástica disminución del acicalado facial en la fase I y II indicando un claro efecto antinociceptivo. Sin embargo, en la dosis de 1 mg/kg IP, la gabapentina tuvo un efecto antinociceptivo sólo en la fase I. La D-serina (100 µg, ICV) no produjo efecto inyectada sola y no antagonizó el efecto antinociceptivo de la gabapentina. Por el contrario, la combinación de la gabapentina-1 mg/kg IP más D-serina redujo significativamente el acicalado facial en la fase II. Este resultado muestra una diferencia con estudios en que la gabapentina induce antinocicepción en la prueba de la formalina en la pata de la rata sólo en la fase II y la D-serina antagoniza a la gabapentina. Los resultados se discuten en relación al proceso de dolor en la pata posterior versus la estimulación dolorosa orofacial.

Gabapentin is a useful agent for the relief of trigeminal neuralgia and orofacial phantom pain. However, there is scarce information on the gabapentin analgesic effect in orofacial pain models. We tested the analgesic action of gabapentin on the formalin-induced face grooming in the rat, an orofacial pain paradigm. IP Gabapentin (10 mg/kg), induced a drastic reduction in face grooming during phase I and II, indicating a clear-cut antinociceptive effect. However, at 1 mg/kg, gabapentin had an analgesic effect only on phase I. D-serine (100 µg, ICV) was silent when given alone and did not antagonize the antinociceptive effect of gabapentin. On the contrary, gabapentin 1 mg/kg plus D-serine significantly reduced face grooming in phase II. These results show a difference between gabapentin induced orofacial analgesia and previous studies showing gabapentin-induced hind paw analgesia in the formalin test, only during phase II, as well as D-serine antagonism of gabapentin. The results are discussed in terms of different pain processing of hind paw, versus orofacial nociceptive stimulation.

Impact of engineered Streptococcus thermophilus trains overexpressing glyA gene on folic acid and acetaldehyde production in fermented milk

The typical yogurt flavor is caused by acetaldehyde produced through many different pathways by the yogurt starter bacteria L. bulgaricus and S. thermophilus. The attention was focused on one specific reaction for acetaldehyde and folic acid formation catalyzed by serine hydroxymethyltransferase (SHMT), encoded by the glyA gene. In S. thermophilus, this enzyme SHMT also plays the typical role of the enzyme threonine aldolase (TA) that is the interconvertion of threonine into glycine and acetaldehyde. The behavior of engineered S. thermophilus strains in milk fermentation is described, folic acid and acetaldehyde production were measured and pH and counts were followed. The engineered S. thermophilus strains StA2305 and StB2305, have the glyA gene (encoding the enzyme serine hydroxymethyltransferase) overexpressed. These engineered strains showed normal growth in milk when it was supplemented with Casitione. When they were used in milk fermentation it was observed an increase in folic acid and in acetaldehyde production by StA2305 and for StB2305 it was noticed a significative increase in folic acid formation.

O acetaldeído, responsável pelo sabor e aroma característicos de iogurte, é produzido por diferentes vias metabólicas pelas bactérias lácticas: Streptococcus thermophilus (S. thermophilus) e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L. bulgaricus). Neste trabalho, a atenção foi focada especificamente na reação para a formação de acetaldeído e de ácido fólico, catalisada pela enzima serina hidroximetil transferase (SHMT), codificada pelo gene glyA. A enzima SHMT catalisa diversas reações e, no caso da bactéria S. thermophilus, ela exerce também a atividade característica da enzima treonina aldolase (TA), definida como a interconversão do aminoácido treonina em glicina e acetaldeído. Foram construídas linhagens de S. thermophilus (StA2305 e StB2305) com super expressão do gene glyA. Estas linhagens modificadas apresentaram crescimento normal quando o leite foi suplementado com hidrolisado de caseína (Casitione). Quando foram usadas para fermentação de leite, observou-se: aumento na produção de ácido fólico e acetaldeído por StA2305 e aumento significativo na formação de ácido fólico por StB2305.

Impact of engineered Streptococcus thermophilus trains overexpressing glyA gene on folic acid and acetaldehyde production in fermented milk

The typical yogurt flavor is caused by acetaldehyde produced through many different pathways by the yogurt starter bacteria L. bulgaricus and S. thermophilus. The attention was focused on one specific reaction for acetaldehyde and folic acid formation catalyzed by serine hydroxymethyltransferase (SHMT), encoded by the glyA gene. In S. thermophilus, this enzyme SHMT also plays the typical role of the enzyme threonine aldolase (TA) that is the interconvertion of threonine into glycine and acetaldehyde. The behavior of engineered S. thermophilus strains in milk fermentation is described, folic acid and acetaldehyde production were measured and pH and counts were followed. The engineered S. thermophilus strains StA2305 and StB2305, have the glyA gene (encoding the enzyme serine hydroxymethyltransferase) overexpressed. These engineered strains showed normal growth in milk when it was supplemented with Casitione. When they were used in milk fermentation it was observed an increase in folic acid and in acetaldehyde production by StA2305 and for StB2305 it was noticed a significative increase in folic acid formation.

O acetaldeído, responsável pelo sabor e aroma característicos de iogurte, é produzido por diferentes vias metabólicas pelas bactérias lácticas: Streptococcus thermophilus (S. thermophilus) e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L. bulgaricus). Neste trabalho, a atenção foi focada especificamente na reação para a formação de acetaldeído e de ácido fólico, catalisada pela enzima serina hidroximetil transferase (SHMT), codificada pelo gene glyA. A enzima SHMT catalisa diversas reações e, no caso da bactéria S. thermophilus, ela exerce também a atividade característica da enzima treonina aldolase (TA), definida como a interconversão do aminoácido treonina em glicina e acetaldeído. Foram construídas linhagens de S. thermophilus (StA2305 e StB2305) com super expressão do gene glyA. Estas linhagens modificadas apresentaram crescimento normal quando o leite foi suplementado com hidrolisado de caseína (Casitione). Quando foram usadas para fermentação de leite, observou-se: aumento na produção de ácido fólico e acetaldeído por StA2305 e aumento significativo na formação de ácido fólico por StB2305.